一、高通量测序技术简介 高通量测序技术( High-throughput sequencing )又称“下一代”测序技术,以能一-次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。 实验过程:样本准备,文库构建,测序反应,数据分析。 (1) 将目标DNA剪切为小片段 (2) 单个小片段DNA分子结合到固相表面 (3) 单分子独立扩增 (4) 每次只复制一一个碱基(A.C,T.G)并检测信号 (5) 高分辨率的成像系统 高通量测序以其高输出量与高解析度的特性,不仅为我们提供了丰富的遗传学信息,而且使得测序的费用和时间大大缩短。在高通量测序发展的过程中,也有很多的问题需要我们去解决:数据在临床诊断上的作用,测序数据的储存和分析,数据的安全和信息隐私等。 二、高通量测序实验室建设:各区独立SICOLAB 实验室各个区域之间无论是否在使用,其在物理空间上应处于永久性的分隔状态; 实验室各区域之间不能有空气的直接流通,比如不可使用联通各区域的中央空调。 三、高通量测序实验室建设材料选择 主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决简单污染、积尘、不易打扫等问题。结构牢固,线条简短,雅观大方,密封性好。 四、高通量测序实验室建设:注意风向 NGS检测通常涉及文库扩增及杂交捕获的过程,会产生大量的核酸。任何的操作动作都可能造成样本或产物气溶胶的形成,极易对以后其他扩增反应造成污染。为防止这种污染的发生,就需要在严格分区的基础上,注意实验室内空气的流向,防止扩增产物顺着空气流进入上游扩增前的相对“洁净”区域。同时除各实验区域与缓冲间应有一定的通风压力差外,各区域内建议增加通风换气次数,有助于残留DNA的清除。
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