稳定细胞系构建服务细胞单克隆源性鉴定

　　1.什么是单克隆源性鉴定
　　稳定细胞系构建服务单克隆源性即对生产的抗体进行溯源，确定是由单一细胞克隆产生的高度均一的抗体。
　　2.单克隆源性鉴定目的
　　近年来重组蛋白药物在治疗疾病，尤其是肿瘤方面有重大应用，而重组蛋白药物大多数由哺乳动物的CHO细胞表达产生。药物评审单位要求研发企业出具该药物所使用细胞的单克隆源性，因此验证工程细胞的单克隆源性是保证蛋白药物一致性的重要手段。
　　3.单克隆获取方法
　　克隆性被认为可以减少细胞库的异质性，常用的单克隆获取方法，如：有限稀释法、ClonePix、流式细胞荧光分选技术、单克隆挑选新技术等。
　　3.1有限稀释法（limiting dilution cloning, LDC）
　　有限稀释法是一种常用的克隆方法，要求铺板密度小于0.5cell/well，该方法的优点是操作简单，对设备的需求比较低，缺点是耗时较长，效率低，并且对人工依赖性比较高，受实验操作人员，实验环境、条件等因素的影响易产生不同结果。
　　3.2 ClonePix法
　　ClonePix是一种高通量的单克隆筛选设备，该方法人工干预少，通量大、效率高，筛选的准确性高。但相比于有限稀释法，ClonePix法筛选的单克隆培养基和后期的生产工艺培养基差距更大，有限稀释法的克隆在孔板的表现更接近于生产时的状态。
　　3.3流式细胞荧光分选技术（FACS）
　　流式细胞荧光分选技术（FACS）是根据细胞大小、荧光染料和细胞表面marker等因素挑选出所需要的单细胞。该方法的优点是单克隆形成率很高，缺点是需要通过条件优化，使挑选的细胞与孔板的孔一一对应，流式细胞仪、细胞的形态及状态对分离效果有影响。
　　3.4单克隆挑选新技术
　　目前市场上有多种单克隆筛选设备可选择，如单细胞打印、Solentim VIPS等，可提高效率，减少对人工的依赖。目前获得单克隆基本上是以上方法的反复联用和使用。