生物药分析公司电转染过程中的影响因素

　　一 电转的简介
　　生物药分析公司电穿孔转染，作为物理方法的一种，不仅能将DNA、RNA，还能将抗体、酶及其他生物活性分子转入细菌、酵母、动物细胞和植物细胞。它是一种高效。简便的基因转移系统，具有其他转移方法无法比拟的优越性，如操作简便、快捷，可重复性强，转染率高，适用广谱等，尤其对目前一般认为难转的悬浮培养细胞也能获得较高的转染。
　　二 电转原理
　　电穿孔法是通过电场作用于细胞几微秒到几毫秒之后，在细胞膜上暂时形成小孔或开口，把大分子如DNA等导入细胞并最终进入细胞核的技术。其过程简述如下：首先在电击过程中，细胞膜上出现穿孔，质粒在电泳力的作用下与细胞膜接触，并在细胞膜上电穿孔的区域形成一种可转移的复合物。再次电击后，质粒脱离复合物并扩散至细胞质内，开始瞬转；同时小部分质粒进入核内与染色体整合，开始稳转。一旦DNA扩散至细胞，膜上小孔会关闭。
　　三 电穿孔转染条件的选择
　　1 电场参数
　　电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。
　　不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以采取较为简便的间接法。文献显示存活率在50%左右的电场参数为理想参数，故可间接测定存活率来确定最佳场强值。
　　2脉冲过程
　　1）脉冲波形
　　脉冲波形主要分为两种：1、方波脉冲；2、指数递减波脉冲。
　　方波脉冲是指：电压瞬间升至预设电压，保持电压放电，然后瞬间终止放电。
　　一般哺乳动物细胞电转染时选择方波脉冲，有较高的转染效率和细胞存活率。
　　指数递减波脉冲是指：先对电容充电，然后让电容完全放电，其电压变化呈指数递减。一般这种波形的脉冲电转染适用于细菌、酵母菌、昆虫细胞。
　　2）脉冲时间
　　脉冲时间的选定主要取决与脉冲波形。在方波脉冲中，脉冲时间可直接设定。在指数递减波脉冲中，脉冲时间是指电压衰减至初始电压1/3时所用的时间，等于电容（C）与电阻（R）的乘积，单位是ms。在参数优化中，增加电压应当降低脉冲时间，而减小电压则应当增大脉冲时间。
　　3）脉冲次数
　　一般而言，对于大多数细胞类型都选择单次脉冲。而在有些情况下可能会用到多次脉冲，因为低电压、短脉冲时间、多次脉冲可有效避免细胞损伤。多次脉冲建议中间间隔1min。