抗体亲和力成熟细胞培养支原体污染来源、检测及去除

　　抗体亲和力成熟细胞培养支原体污染来源、检测及去除
　　一、  细胞培养支原体污染来源及主要支原体种类
　　支原体（Mycoplasma）是一种大小介于细菌和病毒之间（0.1 - 0.6μm），没有细胞壁、并独立生活原核生物，形态呈高度多形性，呈圆形、丝状或梨形。由于支原体直径较小，进行除菌过滤是，约1%的支原体可以直接穿过常规的0.22μm的微孔除菌滤膜，造成细胞的支原体污染。支原体污染的来源包括：（1）工作环境的污染，实验器材带来的污染；（2）操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）；（3）已受污染的培养基、血清，或用来制备细胞的原始组织或器官的污染；（4）污染支原体的细胞造成的交叉污染。
　　目前，已发现的支原体品种有100多种，但根据国内外相关研究发现，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。以下13种支原体污染在全部支原体污染中所占比例超过99%。（1）M. orale、（2）M.Arginini、（3）M.Hyorhinis、（4）A.Laidlawii、（5）M.Fermentans、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）M. hominis、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis。其中尤其是前四种：M.orale（口腔支原体）、M.arginini（精氨酸支原体）、M.hyorhinis（猪鼻支原体）和A.laidlawii（莱氏无胆甾原体）所占污染比例超过95%，前8种占比超过98%。
　　二、  支原体污染对细胞培养的危害
　　1.   支原体污染的普遍性
　　支原体污染是细胞培养领域遇到的全球性问题，据文献报道，综合美国食品药品监督管理局（FDA）、美国模式菌种收集中心(ATCC)等机构收到的相关数据，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。该数据未统计中国大陆的数据，但可以确定，大陆地区的支原体污染比例与此相当，或更严重。
　　2.   支原体污染的危害
　　根据已发表的支原体污染研究文献，支原体污染细胞后，几乎能影响每一个细胞参数。
　　1）   支原体污染可能导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着。
　　2）   支原体影响被污染细胞的基因表达。相关研究表明，支原体污染的细胞系与对照组比较，有多达200个基因表达差异达2倍以上。
　　3）  导致MTT等细胞毒性实验结果严重错误。支原体对MTT有额外还原作用。
　　4）  支原体污染能耗尽营养物，促进代谢积累，重度支原体污染导致pH改变。
　　5）   诱导或抑制细胞因子表达，并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。支原体污染可以直接影响L-arginine的代谢
　　6）   支原体污染可以诱导树突状细胞成熟，这对于开展人体免疫细胞的肿瘤治疗的影响将是灾难性的。
　　3.     支原体污染的隐蔽性
　　支原体大小约0.1 - 0.6微米，体积比病毒稍大，轻度到中度的支原体污染不会明显改变细胞培养液的浑浊度和pH值，也不会导致细胞形态或生长速度的明显改变，所以科研人员很难及时发现体外培养的细胞已经被支原体污染，进而改变了基因表达谱，显示虚假的实验数据和实验结果。通常情况下，如果不排除支原体污染因素，很多实验结果往往缺乏说服力。2013年，国际顶级期刊《Nature》明确要求，在涉及细胞培养的科研工作中，必须进行支原体检测，并排除其影响。